Viability assay (MTT)

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Introduction

MTT assay[1]는 용액의 색 변화를 통해 세포의 생존률을 측정하는 방법으로, 탈수소 효소작용에 의하여 노란색의 수용성 기질인 tetrazolium[2]을 청자색을 띄는 비수용성의 formazan[3] ((304,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide)으로 환원시키는 미토콘드리아의 전자전달 활성을 측정하는 검사법이다. MTT 시험법에서의 formazan의 흡광도는 540nm에서 최대가 되므로 일반적으로, 500-600nm의 파장에서 측정한다.

흡광도가 높을수록 살아있고 대사가 왕성한 세포를 의미한다.

Advantage (장점)

- 간단하고 가장 일반적인 세포 생존률 측정법이다.

- 저렴하다.

Disadventage (단점)

- MTT formazan이 insoluble하기 때문에 녹이기 위해서는 DMSO 같은 유기용매 처리를 해줘야한다. 유기 용매는 세포에 toxic하게 작용할 수 있다

Potential Interference with nanomaterials

Protocols

  1. 100 uL/well 씩 96 well에 세포 부유액을 넣고 배양시킨다.
  2. 세포의 population이 70-80%까지 자라면 상층액을 제거하고 well 당 최종 부피가 300 uL/well로 노출시키고자 하는 나노입자 stock을 세포에 일정시간 노출시킨다.
  3. 노출 후 나노입자에 의한 세포의 morphology 변화를 확인하기위해 microscopy를 이용하여 세포의 이미지를 측정한다.
  4. 상층액을 제거하고, well에 100uL/well 씩 MTT solution을 넣은 후 incubator에서 1시간동안 배양시킨다.

☞ 주의 MTT solution은 빛에 민감하기 때문에 호일로 well을 싸서 빛의 노출을 최소화하여 수행한다.

5. MTT 용액을 제거하고, formazan을 녹이기 위한 유기용매로 DMSO 200 uL/well를 넣고 40분동안 배양시킨다.

☞ 주의 DMSO 역시 빛에 민감하기 때문에 호일로 well을 싸서 빛의 노출을 최소화하여 수행한다.

6. Plate learder기의 사용 30분전에 켜놓고, 안정화시킨후 MTT 측정에 해당하는 최대 파장인 540 nm로 설정한 후 흡광도를 측정한다.

References