Ion Toxicity

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Mn+ stock solution을 준비한다.
  • 주의) 음이온은 독성이 없는 물질로 선택한다.

2. 적절한 농도의 Mn+ 이온 용액으로 희석한다.

(1) 실험에 사용할 세포 배지를 준비한다.

(2) Mn+ 이온 stock solution과 세포배지를 혼합하여 적절한 농도로 노출한다. (최대 1:9 비율)

3. 96 well plate 내 세포를 배양헌다.

(1)세포 계대배양 후, 일부 세포를 희석하여 96well plate에 100μL씩 주입한다.

(2)37℃ CO2 incubator에서 36h 동안 안정되게 배양한다.

4. 방법2에서 준비된 Mn+ 이온 용액을 각기 다른 부피로 세포에게 노출

(1)준비 된 Mn+ 이온 용액을 100μL씩 세포에게 노출한다.

(2)이때, 각 노출 부피 별 3번의 반복 실험군에게 노출한다.

5. 37℃ CO2 incubator에 위치.

(1)Mn+ 이온 용액이 노출 된 96 well plate를 37℃ CO2 incubator에 위치하여 노출하고자 하는 시간 조건에 맞춰 노출한다.

6. Mn+ 이온 용액 제거 후, Viability 측정

(1) 노출 후, 96 well plate에 남아있는 Mn+ 이온 용액을 제거한다.

7. Viability assay

(1) WST assay kit를 준비한다.

(2) 세포 배지와 WST kit를 10:1 비율로 희석한다.

(3) 희석 된 WST 용액을 96 well plate에 100μL씩 노출한다.

(4) 1-4h 노출한다.

(5) Micro plate reader를 사용하여 450nm에서 흡광도를 측정한다.